minigene
mRNA前体的正确剪接是真核生物基因表达的关键步骤,其剪接异常将会影响基因表达量或功能的异常。
minigene技术又称为mRNA异常剪接体外验证实验,是一项针对突变位点是否影响mRNA剪接的细胞水平验证实验。
通过克隆带有变异位点(包括剪切位点附近以及深度内含子中的点突变、插入及缺失等变异类型)的目标基因组片段,构建重组表达载体,转染细胞株后进行RNA抽提及cDNA反转,再利用电泳和测序技术验证该突变对mRNA剪接的影响(外显子缺失、内含子滞留)。
mRNA前体的正确剪接是真核生物基因表达的关键步骤,其剪接异常将会影响基因表达量或功能的异常。
minigene技术又称为mRNA异常剪接体外验证实验,是一项针对突变位点是否影响mRNA剪接的细胞水平验证实验。
通过克隆带有变异位点(包括剪切位点附近以及深度内含子中的点突变、插入及缺失等变异类型)的目标基因组片段,构建重组表达载体,转染细胞株后进行RNA抽提及cDNA反转,再利用电泳和测序技术验证该突变对mRNA剪接的影响(外显子缺失、内含子滞留)。