免疫共沉淀检测

免疫共沉淀(Co-IP)服务介绍 :

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是一项经典的、用于研究体内蛋白质相互作用的核心技术。该技术基于抗原-抗体特异性反应,在非变性条件下温和裂解细胞,从而完整保留蛋白质复合物的天然构象与相互作用状态。通过特异性抗体捕获目标蛋白(“诱饵蛋白”)及其互作蛋白,Co-IP能够真实反映特定组织或细胞中蛋白质的生理性互作关系,是构建蛋白质相互作用网络、解析信号通路及复合物组成的重要工具。


服务原理 :

Co-IP利用偶联于磁珠上的特异性抗体识别并富集细胞裂解液中的诱饵蛋白。在非变性条件下,与诱饵蛋白直接或间接结合的互作蛋白(“靶蛋白”)将一同被沉淀。随后,通过Western Blot(Co-IP-WB)对特定靶蛋白进行验证,或联合质谱技术(Co-IP-MS)高通量筛选未知互作蛋白,系统揭示蛋白质的功能机制与调控网络。


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服务流程 :

  • 项目咨询与设计:根据客户需求,明确实验目的(已知互作验证或未知互作筛选)。

  • 样品制备:在客户提供组织、细胞或蛋白样品的基础上,使用非变性裂解液进行温和裂解,保留天然蛋白互作状态。

  • 免疫沉淀:采用高特异性IP级抗体或标签抗体,与Protein A/G磁珠孵育,特异性富集目标蛋白复合物。

  • 洗涤与洗脱:多次温和洗涤去除非特异性结合,获得高纯度蛋白复合物。


下游分析:

  • Co-IP-WB:对沉淀复合物进行Western Blot分析,验证特定蛋白互作。

  • Co-IP-MS:通过质谱鉴定,筛选并鉴定与诱饵蛋白相互作用的新蛋白。 


技术优势:

  • 体内真实性:直接反映目标蛋白在天然细胞环境中的互作状态,结果更具生理相关性。

  • 复合物解析能力:可捕获多蛋白复合体中的直接与间接相互作用,全面解析复合物组成。

  • 高特异性与灵活性:采用IP级别的高特异性抗体,并可结合标签系统(如Flag、HA、Myc等)进行灵活设计,适用于多种样本类型。

  • 多技术联用:完美衔接Western Blot验证与质谱筛选,兼具靶向验证性与高通量发现能力。 


应用场景:

  • 已知蛋白互作验证:在确定的信号通路中,验证两个蛋白在体内的生理性相互作用。

  • 未知互作蛋白筛选:通过Co-IP-MS技术,从特定组织或细胞中初筛与目标蛋白结合的新伙伴。

  • 蛋白质复合物研究:分离并鉴定特定生理状态下蛋白质复合物的组分。

  • 药物靶点研究:评估药物处理对关键蛋白相互作用的影响,助力靶点筛选与机制研究。 


服务特色:

  • 专业严谨的对照设置:提供包括Input、IgG等同型对照在内的完整对照方案,确保结果的真实性与可靠性。

  • 丰富的项目经验:具备从过表达细胞系到复杂动植物组织等多种样本的处理经验,能有效应对实验挑战。

  • 一站式解决方案:从实验设计、载体构建(如需)、Co-IP操作到最终的WB或MS鉴定,提供全流程专业服务。

  • 深度数据分析:对于Co-IP-MS获得的海量数据,提供专业的生物信息学分析,包括功能注释与候选蛋白筛选,为客户锁定关键目标。

 

常见问题(Q&A)

Q: 没有特异性抗体怎么办?
A: 我司可协助构建带标签(如Flag, HA等)的重组质粒,利用标签抗体进行Co-IP实验。

Q: Co-IP结果如何避免假阳性?
A: 我们通过使用高特异性抗体、设置严格的阴性对照(如IgG对照)以及进行反向Co-IP验证,多重保障以确保互作的真实性。

Q: Co-IP-MS鉴定到大量蛋白如何分析?
A: 我们将基于质谱打分、数据库比对及功能富集分析,为您筛选出与研究方向最相关的候选互作蛋白进行后续验证。


服务周期:

我们致力于在保证高质量数据的前提下,提供高效可靠的服务:

标准Co-IP验证服务:周期一般为 15个工作日。

Co-IP-MS筛选服务:总周期根据鉴定目标的难易程度,通常为 30至60个工作日。该周期已包含Co-IP实验、质谱鉴定及后续数据分析的全部流程。具体时间将根据项目复杂程度(如蛋白丰度、相互作用强度、数据库复杂度等)进行评估和沟通。