酵母双杂交实验
技术原理:
该系统基于真核生物转录因子的模块化特性。将诱饵蛋白与DNA结合域融合,猎物蛋白与转录激活域融合,共同转入酵母报告菌株。若两个蛋白发生相互作用,则会重建有功能的转录因子,从而激活下游报告基因(如HIS3, ADE2, LacZ)的表达,通过观察酵母菌株在缺陷型培养基上的生长情况或显色反应,即可判断蛋白间是否存在互作。
服务流程:
我们提供标准化的酵母双杂交实验流程,确保每项研究具备高度的可重复性与准确性:
1. 载体构建:将客户提供的靶蛋白基因克隆至含BD与AD的酵母表达载体;
2. 酵母共转染:将构建好的BD与AD载体共转染至适宜的酵母菌株;
3. 筛选与验证:通过营养缺陷型培养基(如SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)及β-半乳糖苷酶 assay 等多重报告系统验证互作;
4. 结果分析:提供清晰的实验报告,包括阳性互作对列表、验证图片及数据分析。
服务周期与交付
我们深知科研工作对时效性的要求,因此通过优化的流程严格控制项目周期。
· 标准服务周期:
o 一对一互作验证项目: 一般为 6-8 周。
o 小型文库筛选项目: 一般为 8-12 周(具体时间视文库规模而定)。
· 周期说明:
上述周期从收到客户提供的基因序列或质粒、并确认实验方案后开始计算。周期已包含载体构建、酵母转化、多轮筛选验证、数据复核及报告撰写等全部流程。对于复杂的互作验证或大规模的筛选项目,周期可能会适当延长,我们将在项目开始前提供明确的时间表。
· 加急服务:
我们提供加急服务选项,以满足您紧急的项目需求。具体周期与费用请详询我们的销售专员。
· 最终交付物:
o 完整的实验报告(电子版与纸质版)。
o 所有验证实验的原始数据和图片。
o 实验中构建的关键质粒和酵母菌株(根据客户需求)。
技术优势
· 高灵敏度:可检测弱、瞬时蛋白互作;
· 体内环境:在真核细胞内进行,更接近天然生理状态;
· 高通量能力:适用于文库筛选,寻找未知互作蛋白;
· 多种报告系统:降低假阳性,提高结果可信度;
· 灵活定制:可根据客户需求进行膜系统Y2H、反向Y2H等变体实验。
应用领域
我们的酵母双杂交服务已成功应用于多个研究方向,包括但不限于:
· 蛋白互作网络构建
· 信号通路关键节点蛋白鉴定
· 药物靶点与作用机制研究
· 疾病相关突变对蛋白互作的影响
· 植物、微生物与病毒蛋白宿主互作分析
为什么选择我们?
· 专业团队:拥有多年Y2H实验经验,提供从方案设计到结果解读的全流程支持;
· 成熟平台:稳定高效的酵母系统与载体库,覆盖多种物种与蛋白类型;
· 严格质控:每一步实验均设置阳性和阴性对照,确保结果可靠;
· 保密保障:对客户项目数据严格保密,签署保密协议;
· 快速交付:标准项目周期短,提供加急服务选项。