GST Pull-down技术服务
技术简介
GST Pull-down是一种广泛应用于体外蛋白质-蛋白质相互作用研究的经典技术。该技术通过将目的蛋白（猎物蛋白，Prey）与GST标签蛋白（诱饵蛋白，Bait）在体外非细胞体系中孵育，进而验证或筛选二者之间直接、稳定的相互作用。
技术原理
该技术主要利用谷胱甘肽（Glutathione）与谷胱甘肽-S-转移酶（GST）之间的高亲和性、特异性结合原理。首先，将诱饵蛋白与GST标签融合表达，并在体外进行纯化。随后，将带有GST标签的诱饵蛋白与谷胱甘肽琼脂糖珠结合，“固定”在磁珠上。将此磁珠与可能含有相互作用蛋白的细胞裂解液或纯化的猎物蛋白共同孵育。如果两者存在直接相互作用，猎物蛋白将被特异性地捕获并沉淀。最后，通过洗涤去除非特异性结合蛋白，洗脱复合物，并通过Western Blot（WB）进行检测分析。
服务流程
项目咨询与设计：根据您的需求，共同确定实验方案（如：原核/真核蛋白表达、直接/间接互作验证）。
载体构建（如需要）：将您的“诱饵”与“猎物”蛋白基因克隆至表达载体（如pGEX系列用于GST-Bait，pET系列用于His-Prey等）。
蛋白表达与纯化：在原核（如E. coli）或真核表达系统中诱导表达并纯化获得高纯度、有活性的GST融合诱饵蛋白及猎物蛋白。
GST Pull-down实验：
GST-诱饵蛋白与GSH磁珠耦联。
与猎物蛋白（细胞裂解液或纯化蛋白）共同孵育。
充分洗涤，去除非特异性结合。
使用还原型谷胱甘肽竞争性洗脱结合蛋白。
结果检测与分析：通过SDS-PAGE和Western Blot对Input、Flow-through、Elution等组分进行分析，提供完整实验数据与结论。
技术优势与应用场景
优势 | 应用场景 |
直接互作验证：确证两个蛋白之间是否存在直接结合。 | 已知蛋白对验证：验证通过酵母双杂交、Co-IP等体内实验推测的相互作用。 |
高灵敏度与特异性：适用于弱或瞬时的相互作用。 | 互作结构域/位点 Mapping：通过构建不同截断体，精确定位相互作用的關鍵功能域或氨基酸位点。 |
灵活性高：可研究强变性剂难以处理的膜蛋白等。 | 筛选互作蛋白：以GST-诱饵蛋白为“钓钩”，从cDNA文库表达产物或细胞裂解液中筛选新的相互作用蛋白（常与质谱联用）。 |
体外环境可控：排除细胞内复杂环境的干扰，结果明确。 | 药物靶点研究：在体外评估小分子药物对蛋白互作的影响。 |
与Co-IP技术对比
技术指标 | GST Pull-down | Co-IP |
作用环境 | 体外 (非细胞体系) | 体内 (细胞内自然环境) |
互作类型 | 验证直接相互作用 | 捕获直接和间接相互作用（可能为复合体） |
结果解读 | 结论明确，一对一关系清晰 | 结果更具生理相关性，但需排除间接作用 |
样本要求 | 需要纯化或体外表达的目的蛋白 | 使用细胞或组织裂解液 |
技术关联 | 常作为Co-IP阳性结果的后续验证与补充 | 常作为体内互作的初筛手段 |
服务说明与客户须知
样品提供：您可以选择提供基因序列（由我司完成载体构建与蛋白表达），或直接提供纯化的目的蛋白。
结果交付：包含清晰的Western Blot原始图片、数据分析和详细的实验报告。
质量控制：实验全程设立严格的阳性与阴性对照，确保结果的可靠性与说服力。
项目周期：标准服务周期一般为 15-20个工作日（从收到样品或基因序列起算），具体周期将根据项目复杂程度确认。